Preuve de principe pour le contrôle immunologique de la réactivation globale du VIH in vivo

Contexte Les données émergentes relatives au virus de l’immunodéficience humaine de type VIH-guérison suggèrent que la vaccination pour stimuler la réponse immunitaire de l’hôte, en particulier les cellules cytotoxiques, peut être cruciale pour l’élimination des cellules infectées par le VIH réactivées. Nous présentons les observations d’un contrôleur VIH-élite, non traité avec une thérapie antirétrovirale combinée, qui a connu une réactivation virale après traitement du myélome par le melphalan et la greffe de cellules souches autologues. Modélisation mathématique a été réalisée en utilisant un modèle dynamique viral standard immunospot enzymatique, la coloration des cytokines intracellulaires, et la coloration du tétramère ont été réalisées sur les cellules mononucléaires du sang périphérique; le contrôle in vitro de la production de virions par les cellules T CD autologues à l’aide de lymphocytes T CD a été quantifié; et les titres d’anticorps neutralisants ont été mesurés. Résultats Le rebond viral a été mesuré à des copies / mL le jour après la transplantation avant la décroissance rapide à & lt; copies / ml en phases distinctes avec t / jours et jours Ces cinétiques étaient compatibles avec une expansion des cellules effectrices cytotoxiques et la destruction des cellules T CD productivement infectées. Après la transplantation, des cellules immunitaires innées, y compris des cellules tueuses naturelles, se rétablissent le plus frappant était l’expansion des cellules T CD cytotoxiques hautement fonctionnelles spécifiques du VIH, à des nombres cohérents avec ceux appliqués dans la modélisation, comme le contrôle du virus a été retrouvéConclusions Ces observations démontrent que la réponse immunitaire humaine est capable de contrôler la réactivation globale du VIH coordonnée, Remarquablement avec une puissance équivalente à la thérapie antirétrovirale combinée Ces données guideront la conception des vaccins pour les interventions curatives contre le VIH

À ce jour, le «patient berlinois» est le seul individu infecté par le VIH du type virus de l’immunodéficience humaine connu à avoir atteint une virémie non décelable durable sans rebond après l’élimination du traitement antirétroviral combiné. Ce succès est probablement dû à une combinaison de transplantation avec des cellules provenant d’un donneur dépourvu du récepteur du motif CC chimiokine VIH-corécepteur qui limitait la propagation du VIH, l’irradiation corporelle totale qui épuisait les cellules infectées latentes existantes et la maladie du greffon contre l’hôte. Ces observations ont suscité Récemment, Shan et al, en utilisant un modèle in vitro de latence du VIH, ont observé que la réactivation du VIH n’était pas suffisante pour détruire les cellules infectées, mais que la co-culture avec les lymphocytes T CD stimulés par l’antigène pouvait claires cellules réactivées Cela suggère que, en plus des stratégies qui réactivent VIH contaminé Les cellules T CD, futures approches curatives peuvent également avoir besoin de stimuler les réponses immunitaires, par exemple, par vaccination La réponse immunitaire de l’hôte joue un rôle clair dans le maintien de la charge virale VL contrôle dans l’infection par le VIH L’exemple le plus clair Les personnes infectées par le VIH qui maintiennent le VL & lt; copies / mL sans recevoir le TARa% des personnes infectées par le VIH Ces personnes, appelées contrôleurs d’élite, contrôlent la virémie aiguë virale dans les semaines ou les mois suivant l’infection , ont des numérations lymphocytaires CD plus élevées que les non-CE et beaucoup plus lentement au SIDA Les cellules T CD ont été impliquées dans le contrôle du VIH dans les CE en grande partie à cause de l’enrichissement de certains antigènes de classe I du complexe majeur d’histocompatibilité antigène leucocytaire humain [HLA] -B *, HLA-B *, HLA-B * qui sont également associés à des VL plus faibles et une progression plus lente de la maladie On pense que la protection chez ces individus est largement médiée par l’induction de lymphocytes T CD spécifiques du VIH restreints principalement par ces allèles HLA. Les réponses cellulaires dans les CE démontrent qu’elles ciblent généralement les régions plus conservées du VIH, communément dans la protéine Gag. Au cours d’une infection chronique, les réponses des lymphocytes T CD réactifs au VIH, limitées par le HLA protecteur, sont normalement très fortes ou immunodéprimées. ominantes dans la mutation individuelle du VIH et échappant aux réponses des lymphocytes T CD, lorsqu’elles sont détectées, ont été associées à une progression ultérieure de la maladie D’autres preuves du rôle des lymphocytes T CD proviennent d’études de macaques dans lesquelles l’immunodépression virus T SIV CD pendant l’infection aiguë et l’infection chronique ont entraîné la perte de contrôle viral, avec le contrôle retrouvé que les cellules T CD retournés Des rapports récents ont souligné le fait que le contrôle du virus élite ne correspond pas à la guérison du VIH. activation immunitaire innée, et compte CD plus faible par rapport aux individus non infectés Ces symptômes sont, en partie, entraînés par des niveaux résiduels de virus, avec des études récentes montrant que TARTE peut réduire l’inflammation dans les CE Cela laisse la question de savoir comment La réponse immunitaire chez les personnes infectées chroniquement, même dans les CE, pourrait répondre à une réactivation globale coordonnée du réservoir de VIH proposé dans la stratégie de guérison du VIH Dans cette étude, nous rapportons une EC antirétrovirale infectée par le VIH et antirétrovirale qui a été traitée pour un myélome réfractaire avec myéloablation et une greffe autologue de cellules souches ASCT. Peu de temps après le traitement, une réactivation du VIH aux copies / mL a été observée suivie d ‘un contrôle rapide. de la virémie à & lt; copies / mL, remarquablement à des taux comparables à l’ART Ce patient représente le premier exemple de contrainte post-transplantation d’une réactivation virale à grande échelle médiée par la réponse immunitaire humaine, présentant une opportunité sans précédent de mesurer à la fois la cinétique et les corrélats in vitro

Méthodes

Réaction en chaîne de l’ADN polymérase totale

La réaction en chaîne par polymérase duplex a été réalisée en utilisant ng d’ADN matrice patient avec des paires d’amorces avant et inverse pour pyruvate déshydrogénase PDH, sonde PDH, longue répétition terminale LTR, et une sonde LTR PCR a été réalisée en utilisant Qiagen Multiplex Mastermix à ° C pendant minutes suivies de cycles à ° C pour minute et ° C pour minute Les tests ont été effectués en triple et les résultats ont été exprimés en copies totales d’ADN du VIH par million de cellules.

CD T-Cell Antiviral Assay Extracellulaire p

Le test a été effectué comme décrit précédemment

ELISpot pour la cellule mononucléaire de sang périphérique sécrétant l’interféron-y

Les épitopes des lymphocytes T ont été initialement cartographiés contre des peptides du clade C consensus à l’échelle du protéome à l’interféron-gamma IFN-γ ELISpot en utilisant des cellules mononucléaires du sang périphérique. Les PBMC collectées à la journée ont été testées en triple et en plusieurs jours , et les epitopes optimaux ont été définis. Les réponses des cellules T positives étaient x arrière-plan et & gt; unités de formation de points / cellules suivant la soustraction de l’arrière-plan

Cytokine intracellulaire et coloration au tétramère

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Cytométrie en flux des cellules lymphocytaires

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Modélisation mathématique

Un modèle dynamique viral standard de l’infection par le VIH et des réponses cellulaires effectrices a été analysé et représenté sous la forme d’un système d’équations différentielles. Voir les matériaux supplémentaires qui ont ensuite été résolus numériquement en utilisant Berkeley Madonna v

RÉSULTATS

Un EC-VIH âgé d’un an a été traité pour un myélome réfractaire en utilisant une myéloblation induite par le melphalan suivie d’une ASCT totalisant des cellules. L’ASCT contenait à la fois des cellules souches CD et des cellules lymphoïdes matures. Le traitement par melphalan a précipité la neutropénie et la lymphopénie à jours. Figure supplémentaire, à ce moment, le VIH-VL avait rebondi en copies / ml. Figure A À jours le nombre de lymphocytes avait augmenté aux cellules / mm et VL était copies / ml Figure A L’environnement post-transplantation contient des niveaux élevés d’interleukine-IL- et IL-, connus pour soutenir la prolifération homéostatique de la mémoire, cellules effectrices en grande partie , et peut favoriser la réactivation du VIH – à partir de cellules infectées de manière latente De manière constante, les cellules T CD chez ce patient dans les semaines qui suivent Les cellules ont montré une activation élevée, telle que mesurée par CD et la mort PD programmée et une coloration accrue de Ki Figure C, Tableau, sans changement dans les données de niveaux de CD de la surface cellulaire non montrées, fournissant des conditions propices au VIH – réactivation et propagation

Tableau des changements dans les populations lymphocytaires de la greffe de cellules souches autologues à la résolution des jours de virémie post-transplantation – charge virale & lt; & lt; & lt; Pourcentage de lymphocytes vivants Cellules NK CDa Dont CDCDbright ND Dont CDCDdim ND Dont CD-CDbright ND Dont CD-CDdim ND Cellules NKT CDCD CD Cellules T CDCD- CD Cellules T CDCD B cells CD-CD Prolifération:% Ki Cellules NK Cellules NKT CD Cellules T CD CD Cellules CDCD-CD-B ND Days Post-Transplantation – Charge virale & lt; & lt; & lt; Pourcentage de lymphocytes vivants Cellules NK CDa Dont CDCDbright ND Dont CDCDdim ND Dont CD-CDbright ND Dont CD-CDdim ND Cellules NKT CDCD CD Cellules T CDCD- CD Cellules T CDCD B cells CD-CD Prolifération:% Ki Cellules NK Cellules NKT Cellules T CD Cellules T CD CDCD-CD-B ND Les populations lymphocytaires ont été évaluées par cytométrie en flux et représentées en pourcentage du nombre total de cellules vivantes déterminées par un colorant de viabilité réactive aux amines présent dans chaque échantillon. cellules pour la cellule mononucléaire de jour ou de sang périphérique pendant des jours ,, et Abréviations: ND, non déterminées en raison de trop peu de cellules dans la porte de parent pour l’analyse; NK, killera naturel Les marqueurs définis pour chaque population sont indiqués entre parenthèsesView Large

nombre total de lymphocytes × / mm; carrés rouges et ADN viral total – copies du VIH / millions de cellules mononucléées du sang périphérique [PBMC]; La ligne pointillée représente la limite inférieure de détection de la charge virale de l’ARN du VIH copies du test / mL de plasma Note: La première mesure de l’ADN du VIH était inférieure à la limite de détection et a été tracée à des copies en raison de limitations d’une échelle logarithmique Une chimiothérapie cytotoxique a été administrée au jour B, Fréquence de CD naïfs et sous-ensembles de mémoire au cours du temps: Tcm = mémoire CDROCD centrale, Tem PD orange sur CD lymphocytes T après infusion de cellules souches par rapport aux charges de virus plasmatiques sphères noires Inserts en B et C montrent des fréquences de sous-groupes dans l’échantillon de leucaphérèse prétraitement greffe de cellules souches autologues [ASCT] Le temps de redoublement VL était de jours, semblable à celui observé dans les jours d’infection aiguë Fait important, l’observation confirme que cette CE abritait un virus entièrement réplicable compétent. une décroissance VL caractérisée par des phases Figure A, la première avec t / de jours et la seconde avec t / de jours Cette première vitesse a été dérivée de mesures et donc sujette à une plus grande erreur de mesure Nous avons donc incorporé la variabilité intra-essai du test clinique VL La comparaison de ces taux calculés avec ceux décrits à la suite du traitement antirétroviral a montré que la première phase moyenne t / jours était très similaire à celle de la première phase t / jours. une estimation publiée pour le cART le plus puissant La deuxième phase t / jours était significativement plus courte que les précédentes estimations publiées du% d’intervalle de confiance, -, dérivées de combinaisons antirétrovirales moins puissantes Le pic mesuré augmentation des niveaux totaux d’ADN du VIH dans les PBMC de & lt; copies / cellules pré-melphalan traitement aux copies / cellules au jour, avant la désintégration ultérieure avec des jours de triangles noirs, jour de la figure, le VL avait décliné à des niveaux indétectables Au cours de la baisse observée de jour en jour, CD T-cellules étaient & gt; cellules / mm Figure A comparée à un nombre total de lymphocytes / jour mmat Par conséquent, la disponibilité limitée des cellules cibles est peu susceptible d’expliquer le déclin VL Ces cinétiques cellulaires étaient en accord avec l’examen des demi-vies terminales de la pré-transplantation du patient Texte additionnel I Le patient a obtenu une réponse favorable au traitement du myélome et était dans une phase de plateau stable à des jours. L’ASCT, comparé à l’étape subséquente du contrôle viral durable et des plages normales de sous-ensembles de lymphocytes non représentés présentait un nombre diminué de cellules NK, NKT et NKT naturelles alors que les nombres de cellules T étaient surreprésentés, en accord avec les effets des CSF avant la récolte. ] La cinétique des populations lymphocytaires lors du rebond du virus était également cohérente avec celles de la récupération immunitaire post-transplantation. sur inclure les patients infectés par le VIH Ceci inclut des augmentations des fréquences des sous-groupes NK dans les semaines de transplantation ainsi qu’une expansion frappante des cellules T CD Les cellules B CD du tableau ne se rétablissent qu’après le contrôle du virus Tableau Tableau étaient modestes comparativement aux titres habituellement observés chez les patients virémiques infectés par le VIH et chez ceux qui subissent une interruption du traitement antirétroviral ; il est donc peu probable qu’ils aient contribué au contrôle observé. Nous avons utilisé la modélisation mathématique pour déterminer si cinétique virale et les taux de mortalité cellulaire étaient compatibles avec les modèles établis de contrôle viral des cellules immunitaires cytolytiques Un modèle dynamique viral standard, représenté schématiquement dans la figure A, a été analysé dans les cellules infectées dans la phase éclipse, I, transition vers l’infection productive, I, et avec les deux populations ainsi que les cellules infectées à vie longue, M *, étant des cibles potentielles de la destruction des cellules immunitaires. Le modèle, les effecteurs cytolytiques, E, ont été stimulés par la présence de cellules infectées et se sont développés avec une cinétique de saturation. Le modèle a été représenté comme un système d’équations différentielles et résolu numériquement Matériel supplémentaire Le modèle a pu reproduire les changements observés chez le patient En outre, en changeant les paramètres, nous avons pu explorer les effets des différents processus biologiques modélisés. Nous avons trouvé qu’avec des paramètres qui aboutissaient à un pic de VL à environ un jour, les cellules effectrices qui commençaient à une faible fréquence précurseur étaient encore suffisantes. se développer rapidement près du pic VL et reproduire la cinétique de déclin de la charge virale que nous avons observée Figure B

Figure

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La modélisation mathématique est cohérente avec la destruction des cellules infectées par les lymphocytes T A, illustration schématique du modèle mathématique À gauche, les cellules M, qui pourraient être des macrophages ou des lymphocytes CD au repos, infectées par le virus de l’immunodéficience humaine de type VIH-, V , deviennent des cellules infectées à vie longue, M *, qui sont estimées être responsables de quelques pour cent de la production virale à l’échelle du corps Les cellules à droite, T, sont les principales cibles de l’infection VIH Après infection, les cellules, I, sont dans une phase d’éclipse et ne produisent pas de virus jusqu’à ce qu’ils se transforment en cellules infectées productivement, I Les cellules I et M produisent le virus, Ce virus libre peut à son tour infecter les cellules cibles non infectées. E, contacter les cellules infectées, ils deviennent activés, entraînant à la fois la destruction de la cible infectée et la prolifération de la cellule effectrice Le modèle prend également en compte les taux de mortalité des cellules et le taux de clairance virale B, Résultats de la simulation dans le texte complémentaire; ARN-VIH / mL de cellules solides et effectrices / mL en pointillés Les paramètres utilisés sont les suivants: r = d-, β = × – mL d-, βM = × – mL d-, dT = d-, Tmax = / mL, t = d, M = x / ml, ô = d-, δE = mL d-, δE = mL d-, δEM * = – mL d-, δM = d-, k = d-, q = d-, K =, p = d-, pM = d- et c = d- Les conditions initiales étaient T = x / mL, I = I = M * =, E = / mL et V = / mL Les charges virales générées par le modèle est en accord avec ceux mesurés dans les cercles ouverts du patient L ‘amplitude de la réponse des cellules effectrices est également cohérente en amplitude par rapport au niveau mesuré des réponses des lymphocytes T CD spécifiques du VIH au jour montré sur la figure.

Figure

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La modélisation mathématique est cohérente avec la destruction des cellules infectées par les lymphocytes T A, illustration schématique du modèle mathématique À gauche, les cellules M, qui pourraient être des macrophages ou des lymphocytes CD au repos, infectées par le virus de l’immunodéficience humaine de type VIH-, V , deviennent des cellules infectées à vie longue, M *, qui sont estimées être responsables de quelques pour cent de la production virale à l’échelle du corps Les cellules à droite, T, sont les principales cibles de l’infection VIH Après infection, les cellules, I, sont dans une phase d’éclipse et ne produisent pas de virus jusqu’à ce qu’ils se transforment en cellules infectées productivement, I Les cellules I et M produisent le virus, Ce virus libre peut à son tour infecter les cellules cibles non infectées. E, contacter les cellules infectées, ils deviennent activés, entraînant à la fois la destruction de la cible infectée et la prolifération de la cellule effectrice Le modèle prend également en compte les taux de mortalité des cellules et le taux de clairance virale B, Résultats de la simulation dans le texte complémentaire; ARN-VIH / mL de cellules solides et effectrices / mL en pointillés Les paramètres utilisés sont les suivants: r = d-, β = × – mL d-, βM = × – mL d-, dT = d-, Tmax = / mL, t = d, M = x / ml, ô = d-, δE = mL d-, δE = mL d-, δEM * = – mL d-, δM = d-, k = d-, q = d-, K =, p = d-, pM = d- et c = d- Les conditions initiales étaient T = x / mL, I = I = M * =, E = / mL et V = / mL Les charges virales générées par le modèle est en accord avec ceux mesurés dans les cercles ouverts du patient L ‘amplitude de la réponse des cellules effectrices est également cohérente en amplitude par rapport au niveau mesuré des réponses des lymphocytes T CD spécifiques du VIH au jour montré sur la figure.

Nous avons déterminé si les réponses des lymphocytes T CD spécifiques du VIH dominaient le contrôle observé Bien que les PBMC avant le traitement au melphalan n’étaient pas disponibles, nous avons eu accès à la TCSA quelques jours avant la transplantation. Nous avons supposé que ces cellules étaient l’échantillon de référence. Source majeure de lymphocytes T mémoire au jour Cartographie des réponses des lymphocytes T spécifiques au VIH identifiées épitopes dans Gag et Pol détectables dans la ligne de base et aux points temporels suivants Figure A Le séquençage direct du virus n’a montré aucun changement des acides aminés dans les Gag ou Pol Des epitopes CD restreints aux cellules T, indiquant qu’aucun virus ne s’échappe des lymphocytes T au cours des jours d’étude à partir de la transplantation; données non affichées

Réponses des lymphocytes T TL et Gag – LY mesurées par cytométrie en flux cytokine intracellulaire avant et pendant le rebond VL Pourcentage de lymphocytes T mémoire CD exprimant ou plus de IFN-γ, facteur de nécrose tumorale TNF-alpha, IL-interleukine, et CDa, ainsi que IFN-γ seulement, montré D, cinétique de B *: cellules de GTP-tétramère et VL pendant la période d’étude E, Changements dans l’expression des marqueurs d’activation CD, PD- et CD par des cellules T mémoire Tétramère CD pendant Déclin du VL Note: Les PBMC avant la chimiothérapie n’étaient pas disponibles; cependant, un échantillon de la leucaphérèse du jour – qui a été transplanté le jour a été considéré comme une base et représentatif des réponses des lymphocytes T spécifiques du VIH avant la chimiothérapieFigure View largeTélécharger DiapositiveType de virus de l’immunodéficience humaine spécifique au VIH Les réponses des lymphocytes T ont été initialement cartographiées par l’immunospot de l’interféron-gamma IFN-γ lié à l’enzyme au bout de quelques jours et ont été affinées en épitopes optimaux en fonction de l’antigène leucocytaire humain de type A du patient, IFN- Les résultats des réponses γ ont été mesurés dans l’échantillon de référence et dans les cellules mononucléées du sang périphérique. PBMC au jour post-transplantation Les résultats représentent la moyenne ± unités de formation de points de déviation standard / cellules SFU de mesures triplicates B, Fonctionnalité des réponses TL et LY CD avant-jours, charge virale [VL] & lt ;, pendant les jours, VL mesurée à et jours était et copies / mL, respectivement, et après et jours , VL & lt; Les secteurs ombrés montrent la proportion de chaque combinaison de cytokines C, Gag – TL et Gag – LY T – réponses des cellules T mesurées par cytométrie en flux cytokine intracellulaire avant et pendant le rebond VL Pourcentage de lymphocytes T mémoire CD exprimant ou plus de IFN-γ, facteur de nécrose tumorale TNF-alpha, interleukine-IL- et CDa, ainsi que IFN-γ seulement, montré D, Cinétique de B *: cellules de GTP-tétramère et VL au cours de la période d’étude E, Changements d’expression des marqueurs d’activation CD, PD- et CD par les lymphocytes T à mémoire de tétramère CD au cours du déclin VL Remarque: Les PBMC avant la chimiothérapie n’étaient pas disponibles; cependant, un échantillon de la leucaphérèse au jour – qui a été transplanté le jour a été considéré comme une base et représentatif des réponses des lymphocytes T spécifiques du VIH avant la chimiothérapie, en se concentrant sur les TL et LY Gag spécifiques aux HLA-B * restreints. réponses, nous avons examiné l’IFN-γ, le TNF alpha et la production de IL et l’expression de granules CDA lytiques par cytométrie de flux de cytokine intracellulaire avant-jours, pendant jours, et après et jours de rebond viral. observé pour les deux epitopes:% de cellules T spécifiques à la ligne de base exposées & gt; Figure B Ces proportions sont cohérentes avec les profils fonctionnels des contrôleurs virémiques du VIH qui présentent une fonctionnalité plus large des cellules T CD que les progresseurs virémiques Pendant le jour du rebond du virus, la proportion de cellules positives uniques, en grande partie IFN-γ ou CDa positives, a augmenté dans les deux populations spécifiques TL- et LY d’environ -fold Dans la journée, le phénotype fonctionnel des deux populations cellulaires était très similaire à celui observé au départ. la réponse T fonctionnelle totale mesurée au moins fonction a constaté que les cellules spécifiques TL et LY représentaient% du total des cellules T mémoire CD dans l’échantillon de référence Figure C, ce qui équivaut à environ millions de cellules transférées dans les détails ASCT présentés dans le Section “Méthodes” Lors de la réactivation du virus, la réponse des lymphocytes T fonctionnels spécifiques de TL a augmenté de la Figure C et la coloration parallèle du tétramère HLA-B * -TL a montré que presque % des lymphocytes T CD circulants de mémoire étaient spécifiques après rebond Figure D Les cellules réactives de TL présentaient des données de phénotype de mémoire centrale de CDROCD non montrées, et la coloration de CD et de PD a montré que les cellules étaient fortement activées autour du pic de rebond de virus. Figure E Ces fréquences de lymphocytes T Figure A, lorsqu’elles sont combinées avec le nombre élevé de lymphocytes T CD absolus mesurés après la réactivation du VIH Figure, étaient en accord avec les nombres «effecteurs» qui ont donné Figure BNous avons quantifié la capacité des lymphocytes T CD du patient à limiter la production virale suite à l’infection de cellules T autologues par un isolat de laboratoire VIH. Les cellules T CD fraîches isolées après contrôle des jours de virémie VIH et réduction du VIHp dérivée. à partir de cellules T CD autologues par ordre de grandeur par jour en culture Figure A et B Nous avons ensuite estimé in vitro t / pour l’inhibition du virus Lorsque autolog Les cellules CD ont été infectées in vitro, le surnageant p a augmenté à un taux de / jour En revanche, en présence de cellules T CD autologues à un: ratio, p diminué à un taux de / jour, se traduisant par des jours, qui est similaire aux taux de déclin VL observés in vivo Figure A

Figure Vue largeTélécharger la diapositive Les lymphocytes T CD suppressibles suppriment fortement le type de virus de l’immunodéficience humaine extracellulaire VIH- La production de capside VIH-VIH a été mesurée en utilisant un dosage immuno-enzymatique dans les surnageants de culture moyenne ± déviation standard, n = des jours de cellules T CD dérivées du contrôleur élite,, et infecté par le VIH-BaL A, ainsi que des cellules T CD dérivées d’individus infectés de manière chronique par le VIH n = B en l’absence de symboles fermés ou de présence ouverte de cellules T CD autologues non stimulées: Chaque expérience a été réalisée en triple, et Les cellules T CD tolérantes inhibent fortement la production de capside VIH-VIH-VIH extracellulaire. La production de capside VIH-VIH a été mesurée en utilisant un dosage immuno-enzymatique dans les surnageants de culture ± écart type, n = provenant du contrôleur d’élite jours de lymphocytes T CD -désinfectés, et infectés par le VIH-BaL A, ainsi que par des lymphocytes T CD. ived des individus infectés par le VIH chroniquement n = B en l’absence de symboles fermés ou de présence ouverte des cellules T CD autologues non stimulées: chaque expérience a été réalisée en triple et les données montrées sont représentatives d’au moins des expériences indépendantes

DISCUSSION

Le t / dans la seconde phase était de jours, également comparable aux observations chez les patients traités par TAR En l’absence de TAR, quels paramètres produisaient ces pentes chez le patient D’abord, l’analyse de la cinétique virale a montré que le virus était plus rapide que virémie aiguë Cela suggérait que le virus rebondissant dans cette CE était hautement compétent pour la réplication in vivo, et donc le virus lui-même ne pouvait pas expliquer le déclin observé Un rapport récent a également montré que les isolats viraux des CE étaient pleinement capables de réplication in vivo. Un modèle de souris infectées par le VIH humanisé Deuxièmement, à l’époque pré-ART, les non-contrôleurs infectés par le VIH subissant des procédures similaires de myéloablation et de transplantation présentaient constamment une virémie élevée après la transplantation, indiquant que les régimes de conditionnement ne sont pas utilisés seuls. contraindre la réplication du VIH En outre, l’analyse des données pharmacocinétiques des schémas de conditionnement du patient a montré qu’il était peu probable qu’ils aient un impact viabilité cellulaire, qui est compatible avec le nombre de cellules T CD du patient, qui est resté & gt; En résumé, la cinétique de la LV chez le patient ne s’explique pas par une mauvaise réplication virale ni par la limitation de la disponibilité des cellules cibles. En réponse à cette période de rebond, la réponse des lymphocytes T CD spécifiques du VIH s’est fortement développée. Chez les macaques, le traitement par l’IL de singes infectés par le VIS durablement supprimés a induit une prolifération homéostatique des sous-ensembles de cellules T effectrices des CD et des CD, mais n’a pas augmenté le nombre de lymphocytes T spécifiques du VIS. réponses La cartographie des lymphocytes T a montré que chez le patient, l’épitope immunodominant des lymphocytes T CD correspondait à la réponse dominante des lymphocytes T observée chez les patients HLA-B *: cette réponse T a été détectée chez des patients infection, y compris ceux qui ont par la suite obtenu un contrôle élite L’épitope cible est hautement conservé au niveau de la population, et l’évasion subséquente est associée à une perte significative de la capacité de réplication [ ,] Nous avons suivi la cinétique des réponses dominantes des lymphocytes T et trouvé une forte expansion en réponse au virus, mais sans preuve que les cellules ont été expirées en phase terminale Ces populations cellulaires ont rapidement diminué suite à la réacquisition du virus. des épitopes ont été observés durant la période d’étude, en accord avec les cellules T exerçant une pression immunitaire continue L’analyse d’autres fonctions des lymphocytes T CD pendant la période de rebond a montré que les cellules spécifiques du VIH devenaient fortement activées et, curieusement, semblaient présenter une oligofonctionnalité relative. Les niveaux d’activation ont rapidement diminué lorsque le contrôle viral a été rétabli, avec une plus grande fonctionnalité en termes de production de cytokines et de marqueurs lytiques. Une forte répression in vitro du VIH a été observée à un moment ultérieur après le contrôle du virus lorsque Les fréquences des lymphocytes T CD spécifiques au VIH étaient beaucoup plus faibles. Les réponses des lymphocytes T spécifiques du VIH du patient, combinées au nombre élevé de lymphocytes T CD absolus mesurés après la réactivation du VIH, étaient en accord avec les nombres «effecteurs» dans la modélisation qui produisaient une cinétique VL très similaire à celle observée Chez notre patient Ensemble, ces données suggèrent que la réponse des lymphocytes T CD spécifique du VIH après la réactivation a directement contribué au contrôle viral observé. Cette hypothèse est étayée par des études récentes sur des macaques virémiques dans lesquels le virus se rétablit La récupération du cytomégalovirus CMV est souvent observée après la transplantation, le niveau de cellules T CD réactives au CMV étant corrélé avec le contrôle du CMV. virémie Cependant, en tant qu’étude d’un seul patient, nos observations sont associatives. Nous ne pouvons pas quantifier la contribution in vivo précise. La présence de cellules T CD au contrôle observé n’exclut pas un rôle pour d’autres sous-ensembles, en particulier les cellules NK, chez ce patient, contribuant directement à la cytotoxicité anti-VIH ou indirectement en conférant un bénéfice clinique contre le myélome du patient Les réponses des cellules T induites chez ce patient étaient typiques de celles induites dans d’autres EC, suggérant que les schémas de vaccination qui induisent des réponses T CD largement fonctionnelles, avec un bon potentiel réplicatif et ciblant les régions conservées du VIH, pourraient être plus efficaces pour reconnaître et Cependant, des défis subsistent pour cette approche, par exemple, l’exigence de stratégies de renforcement immunitaire ciblant les épitopes conservés et non mutés suite à la découverte récente que les provirus du VIH dans les cellules infectées latentes de patients chroniquement infectés contiennent presque toujours mutations cytotoxiques des lymphocytes T

Remarques

Remerciements Nous remercions le participant de l’étude ainsi que Samantha Darby, Jude Dorman, Stuart Kirk, Jonathan Lambert, James Davies, Stéphane Hue, Camille Lange, Mala Maini, Dimitra Peppa, John Frater et Lyle Murray. Contributions de RKG, SAW, PM, DP , NMGS, ASP et NG ont conçu les expériences; A S P a conçu des modèles mathématiques; N M G S, R K G, P M, S A W, M M I A-C, A S P, P R G, R B F, N P M et J S ont effectué des expériences; J A G, P R G et R B F ont développé des protocoles expérimentaux et des données analysées; R K G, N G, A S P, N M G S, S G E M, N R, S G E, J A G, P M, S A W et D P ont analysé les données; RKG, NG, NMGS, AJM, ASP et DP ont rédigé le manuscrit. Énoncé d’éthique L’approbation éthique pour cette recherche a été donnée par le Comité national du Service d’éthique de la recherche London-Harrow Le participant à l’étude a fourni un consentement éclairé gonorrhée. Bourse de recherche de RKG WTMA et du septième programme-cadre de la Communauté européenne FP / – dans le cadre du projet Réseau collaboratif de lutte contre le VIH et la résistance aux médicaments anti-VIH CHAIN; Nous reconnaissons également le soutien des Instituts nationaux de recherche en santé, du Centre de recherche biomédicale des hôpitaux de Londres et des Instituts nationaux de la santé pour ASP AI et OD NG, soutenus par le McMichael Trust Fund de l’Université d’Oxford et un prix de recherche sur le VIH. ; NMGS et AJM ont été soutenus par le Conseil de recherches médicales Conflits d’intérêts potentiels SGE a reçu des fonds de Boehringer pour assister à des conférences et a reçu des frais de conférence de Viiv, Gilead et Jansenn Tous les autres auteurs rapportent aucun conflit potentiel Tous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation du potentiel Conflits d’intérêts Les conflits que les éditeurs jugent pertinents pour le contenu du manuscrit ont été divulgués