Le facteur de stimulation des colonies de macrophages granulocytaires induit par Nocardia est neutralisé par des auto-anticorps dans la narcose disséminée / extrapulmonaire

Contexte Les autoanticorps anti-cytokines sont une cause émergente de susceptibilité spécifique aux agents pathogènes chez les adultes non infectés par le virus de l’immunodéficience humaine, auparavant en bonne santé, y compris les macrophages anti-granulocytes. Le plasma des patients atteints de nocardiose disséminée / extrapulmonaire et de témoins sains a été testé pour ses autoanticorps anti-cytokines en utilisant une approche basée sur les particules. La fonction auto-anticorps a été évaluée par coloration intranucléaire de la phosphorylation de STAT induite par GM-CSF dans des conditions normales. Les cellules incubées avec l’activation cellulaire médiée par le GM-CSF du patient ou du plasma normal par Nocardia ont été évaluées par coloration pour la production de cytokines intracellulaires et la phosphorylation STAT intranucléaire. Résultats Nous avons identifié des anticorps neutralisants anti-OGM Les autoanticorps anti-CSF ont été induits par Nocardia in vitro, suggérant un rôle causal des auto-anticorps anti-GM-CSF dans la susceptibilité et la dissémination de Nocardia chez des adultes en bonne santé. avec des infections de Nocardia disséminées / extrapulmonaires inexpliquées autrement, des auto-anticorps anti-GM-CSF doivent être considérés. Leur présence peut suggérer que ces patients peuvent être à risque de développement ultérieur de protéinose alvéolaire pulmonaire ou d’autres infections opportunistes, et que les patients peuvent bénéficier de Administration du CSF

Immunodéficience adulte, autoanticorps anticytokine, nocardiose, GM-CSF, infection opportunisteNocardiose est une infection opportuniste qui survient généralement chez les patients immunodéprimés, en particulier chez ceux présentant des anomalies phagocytaires qui sont induites par des corticostéroïdes systémiques ou observées dans une maladie granulomateuse chronique . certains patients atteints de nocardiose pour lesquels aucun défaut n’a été trouvé La propension de Nocardia à participer au système nerveux central a été longtemps appréciée , bien que les mécanismes sous-jacents restent obscurs. Les autoanticorps anti-cytokines sont une cause émergente d’immunodéficience adulte. Des autoanticorps IFN-γ ont été identifiés dans le contexte d’infections opportunistes disséminées sévères ; anti-interleukine IL A, anti-IL-F et anti-IL-auto-anticorps en association avec et candidose cutanéo-muqueuse chronique ; anti-IL-auto-anticorps dans le cadre d’infections cutanées staphylococciques ; et récemment, les auto-anticorps anti-GM-CSF de facteur stimulant les colonies de macrophages anti-granulocytes en association avec la méningite de Cryptococcus gattii. Les autoanticorps anti-GM-CSF ont été reconnus comme étiologiques dans la plupart des cas de protéinose alvéolaire pulmonaire. accumulation de matière protéinique dans les alvéoles en raison d’une clairance des surfactants GM-CSF dépendante par les macrophages pulmonaires Il est maintenant apprécié que ces auto-anticorps puissent également contribuer à la susceptibilité à l’infection en l’absence de PAP Abrogation du GM-CSF la signalisation, soit par gène knock-out chez la souris ou auto-anticorps neutralisants, impacte d’autres activités phagocytaires et augmente la susceptibilité à l’infection par des opportunistes typiquement contrôlés par les phagocytes, comme les espèces Nocardia, Histoplasma, et Cryptococcus. pour le GM-CSF dans la défense de l’hôte contre ces opportunistesLa reconnaissance de l’anti-GM-CSF a utoanticorps chez des patients précédemment en bonne santé atteints de méningite cryptococcique nous a incités à évaluer le plasma de virus de l’immunodéficience humaine en bonne santé, non infectés par le VIH et autrement immunocompétents adultes avec nocardiose disséminée / extrapulmonaire

MATÉRIAUX ET MÉTHODES

Sujets

De septembre à juillet, nous avons dépisté des patients adultes atteints de nocardiose disséminée / extrapulmonaire qui étaient normalement immunologiquement normaux aux termes du National Institutes of Health NIH comité d’examen institutionnel Protocoles approuvés par la CISR -I- ou -I- Les patients ont été évalués au NIH ou identifiés par une littérature Nous avons examiné les cas publiés de nocardiose disséminée / extrapulmonaire pour tout facteur de risque prédisposant, par exemple le VIH, l’administration de corticostéroïdes par voie générale ou d’autres méthodes. immunosuppresseur significatif associé à une maladie ou iatrogène, a contacté l’auteur correspondant pour tout cas répondant à ces critères publiés au cours des dernières années, et a travaillé avec eux pour caractériser leurs patients, cliniquement et en laboratoire, selon nos protocoles NIH IRB contrôles sains a été obtenu à partir de la banque de sang NIH sous des protocoles appropriés approuvés par l’IRB Les cellules mononucléaires de plasma et de cellules mononucléaires du sang périphérique ont été isolées par centrifugation en gradient de densité

Anticytokine Autoantibody dépistage

Les plasmas ont été testés pour les autoanticorps anti-cytokines en utilisant une approche par particules Les isotypes d’immunoglobulines et les sous-classes d’immunoglobulines G IgG ont été déterminées pour des auto-anticorps anti-GM-CSF en utilisant la même stratégie.

Détection de la phosphorylation STAT induite par GM-CSF

Des CMSP normales et patientes ont été cultivées dans un milieu RPMI complet de Roswell Park Memorial Institute composé de glutamine mM, d’acide mM -hydroxyéthyl-pipérazine-éthanesulfonique, de pénicilline U / mL et de streptomycine μg / mL avec% de plasma normal ou patient. stimulé avec GM-CSF ng / mL; Systèmes R & D pour minutes à ° C Les monocytes ont été identifiés par CD BD Pharmingen avant d’être fixés et perméabilisés pour coloration intranucléaire avec l’anticorps anti-pSTAT Y BD Biosciences Les données ont été collectées en utilisant FACSCalibur BD Biosciences, analysées en utilisant le logiciel FlowJo Treestar, et graphiquement avec le logiciel Prism GraphPad

Préparation de Nocardia

Nocardia cyriacigeorgica souche GU-H NCGU-H a été sélectionnée car il s’agit d’un organisme modèle pour étudier la pathogenèse de Nocardia NCGU-H a été cultivé dans un bouillon Middlebrook h à mi-log à ° C avec une agitation rotative douce. Le culot a été lavé une fois avec la solution saline équilibrée de Hank et deux fois avec du milieu RPMI sans addition d’antibiotiques ou de sérum. Après remise en suspension dans un milieu RPMI, la concentration bactérienne a été évaluée par spectrophotométrie Les unités CFU ont été confirmées par dilutions en série sur des milieux solides.

Induction intracellulaire de GM-CSF induite par Nocardia et phosphorylation de STAT

Les monocytes ont été isolés à partir de PBMC patients ou normaux en utilisant CD MicroBeads Miltenyi selon les instructions du fabricant. Des PBMC ou des monocytes purifiés ont été cultivés dans des milieux RPMI sans antibiotique avec% de plasma normal ou patient. Pour la détection du GM-CSF intracellulaire, les cultures ont été laissées non stimulées ou incubées avec Nocardia multiplié par la chaleur ou vivante multiplication de l’infection de minutes, puis traitées avec brefeldin A μg / mL Cellules ont été colorées pour CD, CD, CD, GM-CSF, et facteur de nécrose tumorale alpha TNF-α BD Pharmingen en utilisant BD Cytofix / Kit de Cytoperm BD Biosciences Les données ont été collectées en utilisant FACSCanto BD Biosciences STAT pSTAT a été détecté dans des cellules cultivées dans des milieux sans antibiotique avec% de plasma patient ou normal et incubées avec Nocardia tué par la chaleur pendant la durée indiquée Les cellules ont été colorées pour CD et pSTAT intranucléaire comme décrit ci-dessus

RÉSULTATS

Initialement, nous avons examiné des patients – avec un tableau de nocardiose du SNC qui ont été référés au NIH pour suspicion d’immunodéficience. Après avoir reconnu que tous étaient positifs pour les auto-anticorps anti-GM-CSF, nous avons identifié des cas supplémentaires. tous les échantillons antérieurs stockés dans notre laboratoire à partir de patients avec des patients atteints de nocardiose disséminée / extrapulmonaire avérée ou probable et,

Tableau Caractéristiques cliniques et de laboratoire Patient Non Âge / Sexe / Ethnicité Anti-GM-CSF Auto-anticorps Statut Nocardia Spéciation et sites Autres infections Comorbidités /

Autre Autoimmunité Nombre absolu de CD Nombre absolu de neutrophiles Analyse DHR Niveau IgG Suivi Observations / M / Blanc blanc Positif N paucivorans cerveau Aucun Aucun cellules / μL cellules / μL Normal mg / dL Résolu; Stable à la prophylaxie TMP-SMX / M / blanc portugais positif Nocardia non cutané aspergillose pulmonaire Aucune cellule / μL cellules / μL Non effectué mg / dL Stable sur TMP-SMX, AMC et GM-CSF / M / US blanc Positif N farcinica cerveau Rien Aucune cellules / μL cellules / μL Normale mg / dL Stable sur TMP-SMX, MXF et GM-CSF / M / US blanc Positif N paucivorans cerveau Aucun Aucune cellules / μL cellules / μL Normal mg / dL Récupération complète après un antibiotique thérapie Off antibiotiques pour & gt; Auparavant rapporté / F / Afro-Américain Positif N astéroïdes poumon, cerveau Cryptococcose disséminée Type II diabète mellitus hémoglobine AC%, cellules nécrosantes de pancréatite nécrosante / μL cellules / μL Pas fait mg / dL Antibiotiques, aucun signe de PAP à ce jour Précédemment rapporté / M / US blanc N négatif N transvalensis CNS Aucun Panhypopituitarisme développé à partir de cellules infectées / μL cellules / μL Normal mg / dL Résolu Précédemment rapporté ; hypo-

gammaglobulinémie probable induite par les stéroïdes / F / US blanc Négatif N beijingensis pulmonaire, présumé CNS Infections pulmonaires chroniques: MAC, Aspergillus, Stenotrophomonas, Serratia Cellules bronchiectasiennes / μL cellules / μL Normale mg / dL Inconnu Patient Non Âge / Sexe / Ethnicité Anti-GM- Statut des auto-anticorps du LCR Spécification de Nocardia et sites Autres infections Comorbidités /

Autre Autoimmunité Nombre absolu de CD Nombre absolu de neutrophiles Analyse DHR Niveau IgG Suivi Observations / M / Blanc blanc Positif N paucivorans cerveau Aucun Aucun cellules / μL cellules / μL Normal mg / dL Résolu; Stable à la prophylaxie TMP-SMX / M / blanc portugais positif Nocardia non cutané aspergillose pulmonaire Aucune cellule / μL cellules / μL Non effectué mg / dL Stable sur TMP-SMX, AMC et GM-CSF / M / US blanc Positif N farcinica cerveau Rien Aucune cellules / μL cellules / μL Normale mg / dL Stable sur TMP-SMX, MXF et GM-CSF / M / US blanc Positif N paucivorans cerveau Aucun Aucune cellules / μL cellules / μL Normal mg / dL Récupération complète après un antibiotique thérapie Off antibiotiques pour & gt; Auparavant rapporté / F / Afro-Américain Positif N astéroïdes poumon, cerveau Cryptococcose disséminée Type II diabète mellitus hémoglobine AC%, cellules nécrosantes de pancréatite nécrosante / μL cellules / μL Pas fait mg / dL Antibiotiques, aucun signe de PAP à ce jour Précédemment rapporté / M / US blanc N négatif N transvalensis CNS Aucun Panhypopituitarisme développé à partir de cellules infectées / μL cellules / μL Normal mg / dL Résolu Précédemment rapporté ; hypo-

gammaglobulinémie probable induite par les stéroïdes / F / US blanc Négatif N beijingensis pulmonaire, présumé CNS Infections pulmonaires chroniques: MAC, Aspergillus, Stenotrophomonas, Serratia Cellules bronchiectasies / μL cellules / μL Normale mg / dL Inconnu Abréviations: AMC, amoxicilline / clavulanate; SNC, système nerveux central; DHR, dihydrorhodamine; GM-CSF, facteur de stimulation des colonies de macrophages granulocytaires; IgG, immunoglobuline G; MAC, complexe de Mycobacterium avium; MXF, moxifloxacine; PAP, protéinose alvéolaire pulmonaire; TMP-SMX, triméthoprime-sulfaméthoxazoleVoir Grand

Cas

Un homme blanc américain non infecté par le VIH, en bonne santé, a présenté en septembre des semaines de maux de tête, d’oubli, de vision floue et de confusion au retour de plusieurs mois en Irak. et changement de ligne médiane Les biopsies du cerveau ont montré une nécrose avec un infiltrat neutrophile et des organismes filamenteux périodiques positifs à l’acide de Schiff PAS; culture Nocardia paucivorans Le phénotypage lymphocytaire et le nombre de neutrophiles étaient normaux. Le test d’oxydation de la dihydrorhodamine était normal, excluant la maladie granulomateuse chronique. L’antibiothérapie intraveineuse incluait le triméthoprime-sulfaméthoxazole TMP-SMX, l’imipénem-cilastatine et l’amikacine Le patient présentait une somnolence et des vomissements progressifs. La patiente a ensuite reçu du TMP-SMX par voie orale et du linézolide pendant des semaines, suivi par du TMP-SMX seul, avec une capacité fonctionnelle complète. Le patient a ensuite reçu du TMP-SMX par voie intraveineuse et de l’amikacine pendant plusieurs semaines. Après un diagnostic de Nocardia, des anticorps anti-GM-CSF ont été détectés au cours des années précédant l’infection. Aphy TDM de la poitrine lors de la présentation initiale a montré des opacités de verre dépoli subtile, peut-être compatible avec PAP Cependant, la capacité normale d’exercice et l’absence de plaintes respiratoires ont détourné d’autres diagnostics

Cas

Un homme blanc portugais non infecté par le VIH, en bonne santé, âgé de sept ans, présentait des semaines de fièvre, de toux, d’hémoptysie et d’asthénie. Une TDM thoracique a révélé une pneumonie, entraînant un traitement par imipénème / cilastatine. Quelques jours plus tard, il présentait plusieurs lésions cutanées érythémateuses. avec ulcération, et nécrose centrale sur les membres, le thorax et l’abdomen; La culture d’une lésion biopsiée s’est développée L’espèce Nocardia Amikacin a été ajouté à l’imipénem-cilastatine et après plusieurs semaines de traitement, les lésions cutanées s’étaient résolues et la pneumonie s’était améliorée, mais une nouvelle cavitation était présente. Il restait fébrile avec des marqueurs inflammatoires élevés. cavité a démontré une invasion bronchique avec des éléments fongiques à partir desquels Aspergillus fumigatus a été cultivé Voriconazole a été ajouté au traitement intraveineux pour Nocardia et le patient a été déchargé après des semaines sur voriconazole, TMP-SMX et amoxicilline-clavulanate. En août, il a développé de la fièvre, des vomissements L’IRM cérébrale a montré plusieurs lésions cérébrales éparses avec un œdème adjacent important suggérant la progression de son infection Nocardia. Malgré la réinitiation des antibiotiques intraveineux, il a eu un nouveau déclin neurologique. L’IRM cérébrale a montré une augmentation de la taille de la lésion et de l’œdème. étaient négatifs La numération des neutrophiles était normale et le phénotypage lymphocytaire a révélé des cellules de lymphopénie CD légères / μL dans le cadre d’une infection active. Sept mois après la présentation initiale, on a recherché des autoanticorps anti-GM-CSF neutralisants. PAP En raison de la détérioration continue, il a reçu du GM-CSF recombinant μg par voie sous-cutanée trois fois par semaine, avec une amélioration clinique et radiologique progressive. Six mois après le début du GM-CSF, le patient a connu une amélioration clinique spectaculaire. Pour cette raison, le GM-CSF a été stoppé. Un mois plus tard, il présentait une hémoptysie, des vomissements, une perte de poids et une pleurésie recristallisés. Le scanner thoracique montrait des lésions compatibles avec une aspergillose invasive et l’IRM cérébrale présentait des lésions élargies avec œdème accru. la cilastatine, l’amikacine et le GM-CSF ont été réinitiés , encore une fois avec amélioration clinique au moment de la rédaction de ce document

Figure Vue largeDownload slideL’évaluation en laboratoire des patients atteints de nocardiose disséminée / extrapulmonaire A, dépistage multiplex pour les autoanticorps anti-cytokines contre le facteur stimulant les colonies de granulocytes macrophages GM-CSF, facteur stimulant les colonies de granulocytes G-CSF, interféron IFN-α, IFN-β, IFN- ω, IFN-γ, IFN-λ, IFN-λ, IFN-λ, interleukine IL-α, IL-, IL-, IL-, IL-, IL-p, IL-, IL-A, IL-F, IL-, protéine inductible à l’interféron gamma, facteur de nécrose tumorale TNF-α et TNF-β chez les patients avec nocardiose disséminée / extrapulmonaire et témoins sains n = B, évaluation de la sous-classe IgG de l’immunoglobuline G anti-GM-CSF chez le patient plasmaFigure View largeTélécharger la lameL’évaluation en laboratoire des patients atteints de nocardiose disséminée / extrapulmonaire A, dépistage multiplex pour les autoanticorps anti-cytokines contre le facteur stimulant les colonies de granulocytes macrophages GM-CSF, facteur stimulant les colonies de granulocytes G-CSF, interféron IFN-α, IFN-β, IFN- ω, IFN-γ, IFN-λ, IFN-λ, IFN-λ, int erleukin IL-α, IL-, IL-, IL-, IL-, IL-p, IL-, IL-A, IL-F, IL-, protéine inductible à l’interféron gamma, facteur de nécrose tumorale TNF-α , et TNF-β chez les patients présentant une nocardiose disséminée / extrapulmonaire et des témoins sains n = B, Évaluation de la sous-classe IgG de l’immunoglobuline G anti-GM-CSF dans le plasma du patient

Cas

Un homme blanc non infecté par le VIH et en bonne santé, âgé de sept ans, présentait des mois de discoordination progressive du bras gauche, des céphalées, des convulsions et des troubles visuels. IRM du cerveau montrant une masse fronto-pariétale droite avec œdème environnant et au moins a montré un nodule -mm dans le lobe inférieur gauche craniotomie pariétale droite avec l’évacuation de l’abcès cérébral trouvé gram positif, faiblement acido-rapide positif et PAS positif organismes filamenteux; Le patient a été traité avec des semaines d’antimicrobiens intraveineux imipénem-cilastatine suivi d’amikacine et d’agents oraux TMP-SMX avec de la moxifloxacine ou du linézolide, sur la base de tests de sensibilité in vitro. ; TMP-SMX et moxifloxacine ont été poursuivis par la suite Des anticorps anti-GM-CSF ont été identifiés plusieurs mois après la présentation initiale. Figure supplémentaire En avril, il a de nouveau présenté un déclin neurologique malgré un traitement continu par moxifloxacine et TMP-SMX Amikacine et linézolide. La biopsie a révélé une inflammation granulomateuse nécrosante floride, bien que toutes les cultures et les colorations aient été négatives. Le GM-CSF sous-cutané adjuvant a été administré trois fois par semaine pour améliorer la cognition et l’IRM quelques mois plus tard.

Cas supplémentaires

Deux cas supplémentaires ont été rapportés ailleurs en détail sans diagnostic connu jusqu’à ce que nous ayons contacté les auteurs. Un homme âgé de sept ans présentait des symptômes systémiques et neurologiques et a été identifié sur biopsie cérébrale pour avoir N paucivorans sur la tache et la culture. a été traitée avec succès pendant des mois avec TMP-SMX, l’imipénème et la moxifloxacine L’autre était une femme afro-américaine âgée de plus de dix-neuf ans qui présentait une méningite cryptococcique. Après examen des dossiers médicaux, elle avait été traitée plusieurs années auparavant. Des cas supplémentaires identifiés au NIH ont été découverts lors de l’examen des dossiers médicaux et incluaient un homme de sept ans avec une culture positive de Nocardia transvalensis du système nerveux central et une femme âgée de bronchectasie chronique et de multiples infections pulmonaires depuis l’âge de, y compris Nocardia beijingensis, qui était présumée être la source des lésions temporales vues par IRM

Anticorps anti-autoanticorps

Figure A Ils étaient exclusivement d’isotypes IgG non représentés et principalement de sous-classe d’IgG Figure B Patients et étaient négatifs pour tous les autoanticorps dépistés Figure AIn PBMC normales, seulement le plasma de patient positif à l’auto-anticorps anti-GM-CSF a inhibé la phosphorylation de STAT induite par le GM-CSF Figure A, tandis que les PBMC de patients lavées de plasma autologue ont démontré une induction de pSTAT normale Figure B; Les PBMC n’étaient pas disponibles pour le patient

Figure Vue largeDiscrétion in vitro du plasma et des cellules du patient A, cellules mononucléaires normales du sang périphérique Les PBMC ont été incubées en présence de plasma normal ou patient et non stimulées ou stimulées avec le facteur stimulant les colonies de granulocytes macrophages GM-CSF coloration intracellulaire pour STAT pSTAT phosphorylée On a mesuré l’indice de stimulation en utilisant le rapport de la fluorescence moyenne géométrique de la coloration de pSTAT pour des conditions stimulées à non stimulées pour chaque personne. Les cellules PBMC ont été incubées en présence de plasma normal ou patient et non stimulées ou stimulées avec le facteur stimulant les colonies de granulocytes macrophages GM-CSF Intracellulaire coloration pour S phosphorylée TAT pSTAT a été mesurée par cytométrie en flux, entrée sur les monocytes B CD, normaux ou PBMC patients non stimulés ou stimulés avec GM-CSF Un indice de stimulation a été calculé en utilisant le rapport de la fluorescence moyenne géométrique de la coloration pSTAT pour des conditions stimulées à non stimulées. chaque personne PBMCs pas disponible pour le patient

Activation de la voie GM-CSF en réponse à Nocardia

Déclenchée à la chaleur et vivante GM-CSF intracellulaire induite par Nocardia et TNF-α en heures et était encore plus proéminente après des heures dans les monocytes normaux Figure A, mais pas dans les lymphocytes normaux non montrée GM-CSF induite phosphorylation STAT induite en minutes, avec maximale signal après quelques minutes La phosphorylation de STAT induite par Nocardia n’était visible qu’après des heures et a culminé à des heures dans les monocytes normaux. Figure B

Figure Vue largeDownload activation de la voie de signalisation GM-CSF A, Cellules mononucléaires normales du sang périphérique Les PBMC ont été incubées avec des milieux seuls ou ont été détruites par la chaleur ou vivantes Nocardia multiplication d’infection en présence de brefeldin A pour ou heures et colorées pour le GM-CSF intracellulaire et le facteur de nécrose tumorale TNF-α B, le cours du temps pour la phosphorylation STAT pSTAT après stimulation avec GM-CSF ou Nocardia dans les PBMC aux moments indiqués sur les monocytes CD ou les lymphocytes CD C, Normalement purifié les monocytes ont été incubés avec du plasma normal, du plasma normal dopé avec un anticorps monoclonal commercial anti-GM-CSF neutralisant, ou du plasma de patient et évalués pour le GM-CSF intracellulaire induit par Nocardia après le panneau supérieur de traitement brefeldin A ou coloré pour le panneau inférieur pSTAT les monocytes ont été évalués pour le GM-CSF intracellulaire induit par Nocardia en présence de plasma normal ou patient et Activation induite par Nocardia du facteur de stimulation des colonies de macrophages granulocytaires Voie de signalisation du GM-CSF A, cellules mononucléaires normales du sang périphérique Les PBMC ont été incubées avec du milieu seul ou tuées par la chaleur ou vivantes multiplication de Nocardia en présence de brefeldine A pour le GM-CSF intracellulaire et le facteur de nécrose tumorale TNF-α B, l’évolution dans le temps pour la phosphorylation de STAT pSTAT après stimulation par GM-CSF ou Nocardia dans les PBMC aux moments indiqués sur les monocytes CD ou les lymphocytes CD C, Normal les monocytes purifiés ont été incubés avec du plasma normal, du plasma normal dopé avec un anticorps monoclonal commercial anti-GM-CSF neutralisant, ou du plasma de patient et évalués pour le GM-CSF intracellulaire induit par Nocardia après le panneau supérieur de traitement brefeldin A ou coloré pour le fond pSTAT. les monocytes des patients ont été évalués pour le GM-CSF intracellulaire induit par Nocardia en présence de cellules normales ou patientes. t plasma et brefeldin A

La signalisation du GM-CSF induite par Nocardia est indépendante des lymphocytes

Les monocytes purifiés ont été incubés avec du plasma normal, du plasma normal dopé avec un anticorps monoclonal commercial anti-GM-CSF neutralisant, ou du plasma de patient, et évalués pour le GM-CSF intracellulaire induit par Nocardia Figure C, le pSTAT induit par Nocardia a été observé dans les monocytes purifiés. incubés avec du plasma normal mais prévenus par des anticorps anti-GM-CSF Figure C, bas de tableau et suivi de la production de GM-CSF induite par Nocardia Comme prévu, les monocytes de patients purifiés produisent du GM-CSF en réponse à Nocardia de manière similaire aux cellules normales. du blocage du GM-CSF extracellulaire par le plasma du patient Figure D

DISCUSSION

Parmi les patients qui étaient négatifs pour les autoanticorps anti-GM-CSF, un présenté comme un adolescent, augmentant la probabilité d’un défaut génétique encore non identifié L’autre avait des antécédents importants de maladie pulmonaire, y compris une bronchiectasie sévère avec des infections polymicrobiennes chroniques, et n’a pas prouvé nocardiose extrapulmonaire; L’amélioration de ses lésions cérébrales impliquait de multiples interventions, y compris l’administration de TMP-SMX. Le GM-CSF induit parNocardia semble être une partie critique de la réponse de l’hôte à l’infection par ce pathogène. La phosphorylation de STAT induite par GM-CSF survient rapidement et en réponse à des concentrations exogènes. GM-CSF aussi bas que pg / mL , alors que pSTAT induit par Nocardia a été apprécié après des heures et a culminé pendant des heures, en accord avec le temps requis pour la synthèse des protéines. Figure A, démontrant que l’induction du GM-CSF ne nécessite pas de réplication ou de métabolisme bactérien et que les facteurs inducteurs sont thermostables. Le blocage du transport extracellulaire des cytokines avec la brefeldine A démontre que la production de GM-CSF et de TNF-α induite par Nocardia ne dépend pas du GM-CSF Figure A Les effets logiques du GM-CSF sur l’activation des récepteurs Toll, la phagocytose, l’activité bactéricide, l’éclatement oxydatif et l’adhésion cellulaire dans les neutrophiles et les macrophages , fournissent une justification biologique de la sensibilité des autoanticorps anti-GM-CSF à la susceptibilité Nocardia Des macrophages pulmonaires mal différenciés, observés chez des patients avec un PAP associé à un auto-anticorps anti-GM-CSF, peuvent entraîner une barrière pulmonaire inefficace, facilitant ainsi la dissémination au-delà du poumon. Un patient présente une atteinte cutanée. Les auto-anticorps anti-GM-CSF dans le sérum et le liquide céphalorachidien pourraient également contribuer à la maladie extrapulmonaire et à l’atteinte du SNC. Les facteurs sous-jacents aux tendances neurotropes de Nocardia demeurent insaisissables et les autoanticorps prédisposent spécifiquement à l’infection du SNC. doivent être étudiés plus en profondeur car plus de cas sont identifiésPAP w comme étant une maladie pulmonaire idiopathique rare caractérisée par une accumulation alvéolaire de matériel lipoprotéineux et des troubles respiratoires associés Des années plus tard, lorsque les souris GM-CSF et GM-CSF cytokine-null ont développé le PAP, Cette voie a été reconnue comme importante dans les PAP humains Peu de temps après, des autoanticorps anti-GM-CSF ont été identifiés et plus tard prouvés [,,] dans environ% des cas de PAP humaine. Typiquement d’autres maladies auto-immunes Les complications infectieuses du PAP ont été rapportées dans les descriptions d’origine et ont été reconnues dans les séries suivantes, en particulier avec Nocardia Cependant, il est resté méconnu que les autoanticorps anti-GM-CSF pourraient conduire à infections opportunistes en l’absence de pathologie alvéolaire Des autoanticorps anti-GM-CSF ont été reconnus chez des témoins sains et des immunoglobulines intraveineuses mais – taux plus bas que chez les patients atteints de PAP et presque exclusivement en tant que complexes liés au GM-CSF, leur laissant une activité biologique résiduelle minime On ne sait pas si ces témoins en bonne santé ont un caractère similaire mais diffèrent ou diffèrent La qualité et la quantité des auto-anticorps pathogènes ne sont pas claires. Ce qui différencie ceux qui contractent l’infection de ceux qui reçoivent le PAP, et ceux qui en sont atteints, peut survenir à un titre différent ou après une durée d’auto-anticorps différente de PAP. Les autoanticorps anti-GM-CSF doivent être recherchés dans le contexte d’infections opportunistes inexpliquées par C gattii et Nocardia, notamment parce que leur présence peut éclairer le traitement ou éventuellement conférer un risque de développement de PAP inhalé et sous-cutané. GM-CSF a été utilisé avec succès dans le PAP, et les patients de cette série semblaient réponse à l’administration exogène de GM-CSF Ces données suggèrent que les doses pharmacologiques de GM-CSF surmontent le blocage des autoanticorps et pourraient bénéficier aux patients qui ne répondent pas aux antimicrobiens. Le rituximab a été utilisé pour cibler les cellules B pathogènes produisant des autoanticorps dans les cas réfractaires [, ] Nocardia induit la production de GM-CSF, mais le blocage de la signalisation GM-CSF peut apparemment permettre la dissémination Les immunodéficiences associées aux autoanticorps anti-cytokines fournissent une fenêtre unique pour comprendre les interactions hôte-pathogène et les signaux critiques qui influencent les résultats des rencontres initiales et subséquentes

Données supplémentaires

Les documents supplémentaires sont disponibles à Clinical Infectious Diseases en ligne http: // cidoxfordjournalsorg Les documents supplémentaires sont constitués de données fournies par l’auteur qui sont publiées au profit du lecteur Les documents affichés ne sont pas copiés Le contenu de toutes les données supplémentaires sont de la seule responsabilité des auteurs ou les messages concernant les erreurs doivent être adressés à l’auteur

Remarques

Avertissement Le contenu de cette publication relève de la seule responsabilité des auteurs et ne reflète pas nécessairement les opinions ou les politiques des NIH ou du Département de la Santé et des Services Humains, du Département de la Défense ou des Départements de l’Armée, Navy, ou Air Force Mention de noms commerciaux, produits commerciaux, ou des organisations n’implique pas l’approbation par le gouvernement américain. Ce travail a été soutenu par la Division de la recherche intra-muros, Institut national des allergies et des maladies infectieuses, aux conflits d’intérêts NIHPotential auteurs: Aucun conflit d’intérêt potentielTous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits d’intérêts potentiels Conflits que les éditeurs considèrent pertinents pour le contenu du manuscrit ont été divulgués