Dépistage du virus de l’herpès simplex dans des échantillons de liquide céphalorachidien à faible volume

La détection du virus de l’herpès simplex (HSV) de type 1 ou 2 dans le liquide céphalo-rachidien (LCR) est considérée comme une urgence médicale, en particulier chez les nourrissons et les jeunes enfants. En l’absence de traitement, l’encéphalite à HSV (HSVE) peut avoir un taux de mortalité de 70%.

La détection rapide et précise du VHS est essentielle pour assurer une prise en charge adéquate des patients. Cependant, il est relativement courant que les laboratoires de microbiologie clinique reçoivent un volume insuffisant de liquide céphalo-rachidien pour effectuer les tests goutte. En fait, à la Mayo Clinic seulement, cela se produit dans environ 10% des échantillons de LCR reçus. Par conséquent, il y a eu un intérêt significatif dans la façon de tester correctement le VHS dans des échantillons de LCR à faible volume.

Pour déterminer la méthode optimale de détection du HSV-1/2, les chercheurs de Mayo Clinic ont comparé la méthode PCR en temps réel de Mayo Medical Laboratories (MML) à trois protocoles conçus pour analyser les échantillons de LCR: 1) extraction de chaleur, 2) dilution 3) un test récemment approuvé par la FDA, le Focus Simplexa® Direct HSV-1/2 (Focus Diagnostics, Cypress, CA). L’étude a été publiée dans le Journal of Clinical Microbiology.

Le protocole d’extraction thermique consiste à chauffer le CSF disponible à 95 degrés Celsius pour libérer l’acide nucléique et ensuite tester 5 microlitres de l’échantillon chauffé. Alternativement, le protocole de dilution dilue CSF disponible à un volume total de 200 microlitres, qui est la quantité de CSF qui est nécessaire pour l’extraction d’acide nucléique standard sur la plate-forme automatisée utilisée au LML. Enfin, le nouveau test approuvé par la FDA (Focus Simplexa Direct HSV-1/2) nécessite seulement 50 microlitres de CSF, qui peuvent être pipetés directement dans le disque de test fourni sans avoir besoin d’une extraction préalable. Fait important, le test Focus Simplexa peut détecter et différencier HSV-1 et HSV-2 en environ une heure.

Matthew Binnicker, Ph.D.

«Déterminer le protocole optimal à suivre dans ces cas est important pour que les prestataires puissent obtenir des résultats et prendre des décisions éclairées sur la façon de gérer leurs patients», a déclaré Matt Binnicker, Ph.D., directeur du laboratoire de virologie clinique à Mayo Clinic auteur de cette étude.

Identifier HSV-1/2 dicte généralement le cours du traitement. Le Dr Binnicker a ajouté: «La détection du HSV-1/2 dans le LCR signifie souvent que les antibiotiques peuvent être arrêtés et que le patient peut être traité avec un antiviral. En revanche, lorsque HSV-1/2 n’est pas détecté, les antiviraux peuvent être arrêtés et d’autres tests peuvent être effectués pour identifier un autre diagnostic. “

L’étude a identifié que les protocoles de chaleur et de dilution avaient une sensibilité de seulement 73,2% et 71,6%, respectivement, par rapport à la méthode de PCR en temps réel de routine du MML. En revanche, le test approuvé par la FDA a montré une sensibilité de 97,8%. De plus, les protocoles de chaleur et de dilution ont donné un grand nombre de résultats «non valides», tandis que le test approuvé par la FDA n’a donné aucun résultat invalide.

Ces résultats démontrent que le test Focus HSV-1/2 Direct fournit une sensibilité supérieure pour tester le LCR à faible volume par rapport aux protocoles d’extraction à la chaleur et de dilution.

“Le test Focus Simplexa Direct HSV-1/2 a montré une sensibilité comparable au protocole PCR en temps réel de MML”, a déclaré le Dr Binnicker. “Notre protocole actuel nécessite 200 microlitres de LCR et a un délai d’environ 4 heures. En revanche, le test Focus Simplexa Direct HSV-1/2 nécessite seulement 50 microlitres de CSF et génère des résultats avec succès en environ 1 heure. “

En partie à cause de ces découvertes, le laboratoire de virologie clinique de la Mayo Clinic fera la transition de tous les tests HSV sur CSF au test approuvé par la FDA au début de l’année 2016.